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利用CRISPR/Cas9技术构建Bpi基因敲除小鼠

2020年07月23日 浏览量: 评论(0) 来源:中国比较医学杂志2020年第6期 作者:张雨 郭中坤 付彬 雷战 聂爱蕊 庄峰锋 王可洲 责任编辑:admin
摘要:利用 CRISPR/ Cas9 基因编辑技术高效构建 Bpi 基因敲除的小鼠模型,并继续繁殖、鉴定及建稳定遗传的 Bpi 基因敲除小鼠品系。

目的    利用 CRISPR/ Cas9 基因编辑技术高效构建 Bpi 基因敲除的小鼠模型,并继续繁殖、鉴定及建稳定遗传的 Bpi 基因敲除小鼠品系。 


方法    针对 C57BL/ 6 小鼠 Bpi 基因的第 2~3 外显子两端设计敲除靶点,筛选高活性 gRNA(guide RNA)靶点,体外转录得到 sgRNA(small guide RNA)并与 Cas9 mRNA 一起显微注射到 C57BL/ 6 小 鼠的受精卵内,经胚胎移植至代孕母鼠体内,获得 F0 代小鼠后,通过基因型鉴定和 DNA 测序获得基因突变的阳性子代鼠。 


结果    筛选到高活性 gRNA 靶点并成功获得体外转录产物 sgRNA;与 Cas9 mRNA 一起通过显微注射的方式获得了 64 枚状态良好的受精卵并成功移植到 2 只代孕母鼠体内;获得了 22 只 F0 代小鼠,经 PCR 鉴定和 DNA 测序后 选择一只单链缺失 708 bp 碱基的阳性小鼠进行扩繁,并在 F1、F2 代检测到该突变,且 F2 代成功繁育出纯合子小鼠。 


结论    成功构建 Bpi 基因敲除小鼠模型,为进一步研究 Bpi 基因及其表达产物的生物学功能奠定了基础。


阅读原文:利用 CRISPR Cas9 技术构建 Bpi 基因敲除小鼠.pdf



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