RSS订阅

实验方法

选择原代细胞的原因

2020年07月24日 浏览量: 评论(0) 来源:赛业生物 作者:小赛 责任编辑:admin
摘要:长期以来,科学家多依赖永生化的细胞系来进行各种研究,但在过去十年,随着细胞生物学的发展,细胞培养领域发生了巨大变化,新型的技术和培养试剂让使用原代细胞作为研究对象成为可能。相比于细胞系,原代细胞更多保留了体内原始组织的生物学特征,如生长和衰老,因此通过原代细胞可建立更好的细胞疾病模型。

原代细胞

长期以来,科学家多依赖永生化的细胞系来进行各种研究,但在过去十年,随着细胞生物学的发展,细胞培养领域发生了巨大变化,新型的技术和培养试剂让使用原代细胞作为研究对象成为可能。相比于细胞系,原代细胞更多保留了体内原始组织的生物学特征,如生长和衰老,因此通过原代细胞可建立更好的细胞疾病模型。 

原代细胞(Primary cells)是指来源活体组织,经过特定分离方法制备而成的初始细胞。 

原代细胞离体时间短且不经过永生化过程,其生物学特性未发生很大变化,仍保持原有的遗传特征,可更好地反映细胞在体内的生长状态,从而获得与体内生理功能更接近的数据,很适合用于药物测试、细胞分化和转化等实验研究。 

01 原代细胞与细胞系该如何选?

原代细胞生长缓慢,一般认为,原代细胞培养的第1代和传代到第10代以内统称为原代培养。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了,细胞的生长会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去,这些存活的细胞一般能够传到40-50代,这种传代细胞叫做细胞株。当细胞传至50代以后又会出现“危机”,这时有部分细胞的遗传物质发生了改变且带有癌变的特点,从而可能无限制地传代下去,这种传代细胞称为细胞系。 

细胞系因其容易培养、种类多、产量可观的优点一直是细胞水平研究的首选,且价格相对低廉,但细胞系“价廉却不一定物美”。研究发现,细胞系在连续培养的过程会不断发生突变,长时间的多次传代可能会导致细胞系的基因型和表型都发生变化,从而影响实验结果。例如有研究报道,HEK293经腺病毒转染后得到的细胞更接近未成熟神经元细胞;MDA-435作为乳腺癌细胞被广泛用于各种研究,但近年来越来越多证据表明其可能为一种黑色素瘤细胞。 

原代细胞则不存在这些问题,虽然原代细胞分离和培养的成本可能相对更高,但原代细胞作为更接近体内环境的研究模型,可让你的研究结论更加接近“事实”,且原代细胞的使用可减少动物实验所需的成本开支。另外在某些人体体内无法进行的实验,原代细胞因其高度保持了在体内的生物学特性,可在一定程度解决这个问题。

特征原代细胞细胞系
增殖能力较弱
繁殖代数一般只能传10代以内50代左右或以上
遗传完整性遗传物质未改变发生改变
生物特性接近体内细胞生理学随着分裂次数而偏离
培养难易程度较为困难容易

原代细胞与细胞系对比 

由于永生化的细胞系与体内组织细胞的生物特性相差甚远,导致许多生理和病理的过程难以重复,近年来,原代细胞正逐步成为细胞和分子生物学研究的首选工具,为疾病机制、药物研发等提供了高质量的模型。但不可能否认的是,细胞系在科研中的地位仍十分重要,例如在标准化方案的确立上细胞系是良好的工具,某些需要大量细胞的研究如全基因组遗传筛选,由于原代细胞数量有限且对培养条件要求苛刻,细胞系也是第一选择。 

02 原代细胞的分离与培养

原代细胞是出了名的难养,对培养环境和实验操作的要求更苛刻。原代细胞在体外通常只能传代少数几次,某些原代细胞(如神经元细胞)甚至无法进行传代。对于研究人员来说,如何才能经济高效地培养好原代细胞,并围绕这有限几次传代的细胞设计实验,是更大的一个挑战。 

原代细胞是取材于切除的动物组织,通过酶处理,在适当的条件下培养直至达到足够的数量。分离的原代细胞有两种类型:贴壁细胞(锚定依赖性生长)和悬浮细胞(锚定非依赖性),贴壁细胞多来自器官组织,而悬浮细胞多来自血液系统的细胞。 

从组织制备原代细胞,即使捱过了极其严苛的解离步骤,不严谨的分离操作可能会导致细胞生长缓慢、表型不一致甚至细胞污染,特别是由于组织中可能含有细菌等微生物,污染问题对于原代细胞的分离和培养是一个很大的隐患。而为了让研究人员不再为这些问题头疼,现在已经出现了一些细胞公司可供应现成的原代细胞,并对应配有充分优化的培养基和实验方案,这使得原代细胞的培养和研究比以往要轻松得多。 

而对于具备自主从组织中获取原代细胞的实验室,也建议以商业化的原代细胞作为对照,采用均一性和稳定性更好的P2/P3代次进行实验,并用专门的原代细胞培养基进行培养,最大限度提高原代细胞的生长。 

好物推荐

OriCell团队在长期的细胞研究过程中不断优化实验条件,针对不同客户研究需要,提供包含神经元细胞、星形胶质细胞在内的多种OriCell原代细胞产品,产品经过细菌、真菌、霉菌、支原体和病毒检测,表达多种神经细胞特异性标记。针对OriCell原代细胞的营养需求研发专用的培养产品。OriCell原代细胞完全培养基特别添加能有效改善细胞生长状态的营养物质和针对不同物种特别甄选的优质培养液,适合各类原代细胞的体外培养。 

☑ 神经元+神经元完全培养基

OriCell神经元系列产品取自18.5天胎鼠或者新生鼠的海马区和大脑皮层,原代直接冻存。检测结果表明,本产品无细菌、真菌、霉菌、支原体和病毒污染,Tubulin和MAP2表达水平高。 

☑ 星形胶质细胞+星形胶质细胞完全培养基

OriCell星形胶质细胞系列产品取自新生鼠的大脑皮层,经过纯化传代扩增至第一代冻存。检测结果表明,本产品无细菌、真菌、霉菌、支原体和病毒污染,GFAP表达水平高。 

☑ 人成纤维细胞+成纤维细胞完全培养基

人成纤维细胞来源于牙周膜,检测结果表明,本产品无细菌、真菌、霉菌、支原体和病毒污染。 

☑ 小鼠胚胎成纤维细胞+成纤维细胞完全培养基

OriCell小鼠胚胎成纤维细胞取材于怀孕13.5天的ICR小鼠胚胎,使用其专用完全培养基贴壁培养至第一代,并且经过γ-射线照射处理后冻存。经检测,确认无细菌、真菌、霉菌、支原体和病毒污染,经细胞培养测试能够支持ES细胞的生长,维持ES的未分化状态。 

☑ 人脐静脉内皮细胞+人脐静脉内皮细胞完全培养基

血管内皮细胞是覆盖在血管内膜表面纵向排列的单层扁平细胞,经检测,确认无细菌、真菌、霉菌、支原体和病毒污染。 

关于OriCell®

OriCell®是赛业生物旗下致力于干细胞试剂及干细胞技术服务的子品牌,作为拥有14年历史的科研干细胞供应商,OriCell®旗下拥有规模庞大、品种齐全的科研干细胞库。自主开发了百余种干细胞及原代细胞产品,独立起草的数十种科研干细胞标准更已成为国际主要参考的干细胞技术标准。OriCell®干细胞及相关培养基已服务数万客户,获得了市场占有率和满意度的双赢。OriCell®提供的干细胞诱导分化服务、细胞基因编辑服务与稳转细胞株构建服务已帮数千名科研人员解决了科研难题,产品与技术已直接应用于包括CNS(Cell, Nature, Science)三大期刊在内的3600余篇学术论文。如有需要,欢迎联系我们咨询。

相关文章
  • 没有相关内容!
点击这里给我发消息 点击这里给我发消息 点击这里给我发消息