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模型制备

小鼠肺结核杆菌模型

2020年09月09日 浏览量: 评论(0) 来源:《人类疾病动物模型复制方法学》 作者:周光兴 责任编辑:yjcadmin

(1)复制方法  人型结核分枝杆菌在改良罗氏培养基上培养2~3周,取生长良好的培养物,用玛瑙乳钵研磨成5mg/ml的均匀菌悬液(含0.05%吐温80的灭菌生理盐水溶液),于每只小鼠尾静脉内注射0.2ml(约10000000CFU)。模型动物感染观察过程中,定期作细菌分离培养,并处死动物,取其组织器官,镜10%甲醛溶液固定,作常规组织切片,HE染色,光镜下观察。

(2)模型特点  脏器涂片镜检和培养发现,心肌、心包膜、主动脉干、冠状动脉、肝、脾、肺、肾和淋巴结等均可有结核菌存在。镜下病理学检查见心包膜以淋巴细胞、单核细胞浸润为主的炎性反应;心肌以部分肌纤维短裂、溶解,淋巴细胞和单核细胞聚集为主,主动脉干的内壁不规则,伴有较多淋巴细胞和单核细胞聚集的炎性反应为多见。肝、脾、肾可见坏死,脑有淋巴细胞浸润的炎性反应。用BCG免疫组化染色,模型动物脏器可检测出BCG阳性。电镜下,线粒体明显肿胀,排列紊乱,肌纤维溶解,可见基膜。对不同品系小鼠的结核菌感染实验表明,NIH和BALB/c对结核菌不敏感,615和TA1小鼠的性别差异大;TA2和DBA/2虽然对结核菌较敏感,但每克脏器结核菌含量显著低于C57BL/6N和 KM小鼠。

(3)比较医学  人类感染结核杆菌后,只有小部分人可引起急性疾病过程,大部分人能形成有效的免疫应答,阻止疾病的发展,成为无临床症状的潜伏感染状态,可持续数年甚至数十年。当机体抵抗力降低或应用糖皮质激素时,这种潜伏感染可再次被激活形成活动性疾病。潜伏感染模型最早采用小量结核杆菌感染的方法建立,后来采用感染细菌后用抗结核药物治疗来造模。本模型的建立涉及较多参数,如感染菌量、感染途径、抗结核药物治疗的开始时间、药物剂量、治疗时间、停药时间以及抗结核药物治疗终止到免疫干预的时间间隔等,目前本模型还不能完全反映人结核病的所有临床症状,但仍是研究结核杆菌潜伏感染的重要工具,可不同程度地模拟人体疾病发展过程,为研究潜伏感染状态下结核杆菌生理特性、免疫学机制,为解释潜伏感染的发生提供病原学方面的材料,同时为新药筛选和疫苗筛选、治疗 MTB潜伏感染提供依据。


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