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小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

2020年09月16日 浏览量: 评论(0) 来源:实验动物科学2019年第6期 作者:李晓波 付瑞 王吉 王淑菁 王莎莎 李威 秦骁 黄宗文 贺争鸣 岳秉飞 责任编辑:admin
摘要:建立小鼠巨细胞病毒(Mouse Cytomegalovirns,MCMV)荧光定量PCR方法并对其进行初步应用。

目的 建立小鼠巨细胞病毒(Mouse Cytomegalovirns,MCMV)荧光定量PCR方法并对其进行初步应用。


方法  选取NCBI发表的MCMV Smith株DNA polymerase基因保守序列设计引物探针,建立MCMV的荧光定量PCR方法,对方法的特异性、敏感性、重复性及稳定性进行验证,并应用该方法检测掺人MCMV的小鼠血液样品及2018年度送检的409份小鼠血液样本。


结果  建立的MCMV荧光定量PCR方法标准曲线 Slope为-3.418,R²值为0.999,扩增效率为96.137%,可定量检测到的MCMV最低含量为47 copies/μL。以大鼠巨细胞病毒,猴巨细胞病毒,人单纯疱疹病毒,伪狂犬病毒及霜疱疹病毒I型为模板均无扩增曲线,特异性良好。方法组内和组间变异系数分别为0.39%-0.68%和0.48%-1.01%,重复性和稳定性好。可检测到掺人小鼠血液样品中MCMV病毒的最大稀释度为1∶1000(100.75 TCID50/0.1mL),409份小鼠血液样品经检测均为阴性。


结论 建立的小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR方法有很好的敏感性、特异性及稳定性,可有效地检测小鼠中MCMV,为实验小鼠MCMV的监测及相关标准的补充完善提供了技术参考。


阅读原文小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用.pdf

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