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高效液相色谱技术

高效液相色谱技术

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高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)又叫高压、高速、近代液相色谱,通常叫做高效液相色谱。它是60年代中期才建立的一种高效快速分离化合物的方法,到了70年代后期才广泛用于蛋白质的分离纯化方面,现已成为分离纯化蛋白质非常有效的方法之一。
和经典常压色谱相比有以下特点:
1、HPLC分离、纯化蛋白质的速度快。通常半小时左右可进行一次,大大缩短了纯化蛋白质的时间;
2、分辩率高。一根长10cm的色谱柱可分离十几种以上的物质;
3、适应面广,灵活性强,几乎所有的蛋白质根据它们的性质差别(等电点、疏水性、分子量、电荷分布等)都可以用不同HPLC方法进行分离提纯;
4、灵敏度高。HPLC现已广泛采用多种高灵敏度的检测器,如紫外、荧光、电导等。荧光的灵敏度可达10-9g;
5、重复性好,在作分析蛋白质分析试验时,误差一般不超过5%。
因此,HPLC在蛋白质分离纯化方面具有极其重要的位置。当然HPLC也有它的缺点,例如,仪器设备价格昂贵,虽然已有制备柱使用,但制备量还是受到限制,在某些方法中,由于使用有机溶剂,对蛋白质的活性会有一定影响。高效液相色谱仪是高效液相色谱的专用仪器,有很多种类,从类型看分为综合型高效液相色谱仪和专用型仪器,从功能上分为分析型、制备型、分析和制备兼用型。 
高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)的主要优点是: 
1、分辩率高于其它色谱法 
2、速度快,十几分钟到几十分钟可完成
3、重复性高;
4、高效相色谱柱可反复使用; 
5、自动化操作,分析精确度高 根据分离过程中溶质分子与固定相相互作用的差别,高效液相色谱可分 四 基本类型,即液-固色谱、液-液色谱、离子交换色谱和体积排阻色谱。
高效液相色谱在生物领域中广泛用于下列产物的分离和鉴定: ⑴氨基酸及其衍生物; ⑵有机酸; ⑶甾体化合物; ⑷生物硷;⑸抗菌素; ⑹糖类;⑺卟啉; ⑻核酸及其降解产物; ⑼蛋白质、酶和肽;⑽脂类等。

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