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疾病与药物研究

过表达骨形态发生蛋白4对兔骨髓间充质干细胞增殖与成软骨的影响

2021年01月28日 浏览量: 评论(0) 来源:《实验动物与比较医学》2020年第2期 作者:张飞 党源 薛来恩 温福利 郑和平 胡德庆 责任编辑:admin
摘要:通过腺病毒(Ad)载体感染过表达骨形态发生蛋白4BMP-4),研究BMP-4对兔骨髓间充质干细胞BMSCs)体外增殖和成软骨的影响。

目的 通过腺病毒(Ad)载体感染过表达骨形态发生蛋白4BMP-4),研究BMP-4对兔骨髓间充质干细胞BMSCs)体外增殖和成软骨的影响。


方法 全骨髓贴壁法分离获取BMSCs,传代培养提升细胞纯度,通过细胞形态学及流式细胞术测定表面分子标志物以鉴定细胞;设立病毒感染复数(MOI)梯度组,通过倒置相差显微镜和流式细胞仪确定最佳MOI;酶联免疫吸附试验(ELISA)及蛋白印迹法分析过表达BMP4对细胞分泌Ⅱ型胶原(COLL Ⅱ)、性别决定基因盒9(Sox9)和BMP-4的影响;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法鉴定过表达BMP-4对BMSCs体外增殖的影响。


结果 原代细胞呈圆形、椭圆和梭形不等,第2代细胞呈典型成纤维样长梭形,漩涡状分布,低表达造血干细胞表面分子标志物CD34(1.94%)和CD45(2.13%),高表达CD44(98.2%)、CD29(99.7%)和CD90(98.8%)。MOI为100时,病毒感染效率较高,且对细胞损伤最小,为最适MOI。与对照组相比,过表达BMP-4能显著促进BMSCs的增殖,并能分泌成软骨特异指标COLL Ⅱ、BMP-4及Sox9(P<0.05)。


结论 过表达BMP4能显著促进BMSCs的增殖及向软骨分化。

阅读原文:过表达骨形态发生蛋白4对兔骨髓间充质干细胞增殖与成软骨的影响.pdf



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