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小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用

2021年02月09日 浏览量: 评论(0) 来源:《实验动物与比较医学》2020年第2期 作者:王吉 王莎莎 付瑞 王淑菁 李威 秦骁 黄宗文 李晓波 巩薇 岳秉飞 贺争鸣 责任编辑:admin
摘要:建立小鼠肝炎病毒(MHV)实时荧光定量PCR检测方法,并初步应用于实验裸腰鼠等啮齿类动物的检测。

目的 建立小鼠肝炎病毒(MHV)实时荧光定量PCR检测方法,并初步应用于实验裸腰鼠等啮齿类动物的检测。


方法 选择MHVE基因保守区域设计合成特异性引物和探针,建立荧光定量PCR方法,并对方法特异度、敏感度、线性、重复性和稳定性进行方法学验证。同时用建立的方法对79只清洁级小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼹鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠进行MHV检测。


结果 成功建立了MHV实时荧光定量PCR方法;方法的线性范围为(1×101~1×109)拷贝/μL,与仙台(SV)病毒、呼肠孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠状病毒(BCV)均无交叉反应,方法的检测敏感度为10拷贝/L。重复性和稳定性试验显示实验间变异系数均小于5%。检测结果显示63只裸鼹鼠、35只SPF小鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠均为阴性。79只清洁级小鼠MHV阳性率为22.78%。建立的方法与RT-PCR比较,可信度达97.47%。


结论 建立的MHV 荧光定量PCR方法特异、敏感,能够对多种啮齿类动物体内携带的 MHV 进行检测。


阅读原文:小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用.pdf

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