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实验方法

一种快速定量检测猴组织中SIV/SHIV的方法

2021年02月09日 浏览量: 评论(0) 来源:中国比较医学杂志2020年第12期 作者:高歌 孟凤珍 姚艳丰 责任编辑:yjcadmin
摘要:以猴-人免疫缺陷病毒(simian-human immunodeficiency virus,SHIV)gag 基因为特异性扩增靶标,建立一种快速、灵敏、特异的TaqMan实时荧光定量 PCR 法检测猴血浆、外周血单核细胞和淋巴结中的猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)和 SHIV。

目的    以猴-人免疫缺陷病毒(simian-human immunodeficiency virus,SHIV)gag 基因为特异性扩增靶标,建立一种快速、灵敏、特异的TaqMan实时荧光定量 PCR 法检测猴血浆、外周血单核细胞和淋巴结中的猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)和 SHIV。


方法    以SHIVSF162p3n gag基因为模板,用普通PCR方法扩 增出109 bp DNA 片段用于克隆构建标准品质粒pGEM􀳏 -T-SHIV gag。 通过对SHIV标准品质粒定量分析,优化反应体系,检测TaqMan实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异度和重复性。


结果    TaqMan实时荧光定量 PCR 法能 有效地检测出102~107copies/μL SIV/ SHIV gag基因 mRNA,线性系数为R2=0.998,slop=-3.304。 方法重复性检 测显示CV%在0.6%~1.1%之间。


结论    该TaqMan实时荧光定量PCR法具有快速、灵敏和特异性高的优点,适用于 SIV/SHIV感染猴动物模型的研究工作。


阅读原文:一种快速定量检测猴组织中SIV,SHIV的方法.pdf



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