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疾病与药物研究

半氟化烷烃(f4h5)作为环孢霉素A的一种新载体:有预防性和前途的干眼局部治疗新选择

2017年08月18日 浏览量: 评论(0) 来源:Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology April 2017, Volume 255, Issue 4, pp 767–775 作者:李晓菲译 责任编辑:admin
摘要:环孢素A(CS)已被用于有效的治疗局部炎症性干眼病超过十年。然而,由于其亲脂性,CS配制成乳剂或油性溶液用于局部应用。本实验研究的目的是测试如果使用氟化烷烃(sFas)作为无防腐剂,耐受性良好,无刺激、可燃性是否能维持或改善CS对干眼病的局部治疗。
摘要:环孢素A(CS)已被用于有效的治疗局部炎症性干眼病超过十年。然而,由于其亲脂性,CS配制成乳剂或油性溶液用于局部应用。本实验研究的目的是测试如果使用氟化烷烃(sFas)作为无防腐剂,耐受性良好,无刺激、可燃性是否能维持或改善CS对干眼病的局部治疗。
 
方法:干燥应力应用于C57BL/6小鼠连续14天诱导实验性干眼症。溶解于SFA的CS、仅含0.5%乙醇的F4H5同0.05%CS(CS / f4h5)、地塞米松每天应用三次,在4天或11天干眼诱导结束后连续应用3周。
 
结果:同其他组相比,CS / f4h5证明有较高的疗效并能较早减少角膜染色。在这个研究中,在诱导干眼病4天后,使用CS / f4h5,其有能力保持结膜杯状细胞密度。从颈部淋巴结流式细胞仪分析结果显示在CS/ f4h5组有较低的CD4 +和CD8 + T细胞。但区域淋巴结T细胞并没有差异。
 
结论:在实验小鼠模型,同市售CS及地塞米松组相比,CS / f4h5被证明是同样有效且具有显著更快的降低干眼病症状的治疗反应。
 
关键词:干眼病  环抱霉素  干燥应力  小鼠模型
 
简介:干眼病(DED)是眼表面最常见的疾病,同泪腺功能障碍,泪液中的变化,角膜和结膜上皮病变及连续的炎症相关。轻度的干眼病和连续的眼部不适主要以人工泪液控制。而干眼及炎症反应更加严重和慢性病例的治疗包括外用激素或环孢素(CS),外用或口服抗生素,外用自体血清滴剂,甚至全身免疫抑制剂。然而,一些这些治疗策略引起广泛的副作用,例如,白内障,青光眼,或感染,局部应用有强烈的烧伤感。对于使用免疫抑制剂,目前唯一FDA批准治疗干眼病的药物是0.05%环孢霉素乳剂。环孢素是一种钙调神经磷酸酶抑制剂,针对T细胞的反应,并增加泪液分泌,减少上皮损伤,增加杯状细胞密度和视力,但也改善干眼症患者的主观症状。SFAs是线性分子组成的烃类和氟碳段有特殊的特点,有一定的亲脂性、低表面张力和界面张力、高生物相容性。在这项研究中,一个实验性干眼症病小鼠模型被用来研究半氟化烷烃f4h5作为CS新载体影响干眼病的早期和晚期治疗。
 
材料和方法:诱导干眼病:10-12周龄雌性C57BL/6小鼠诱导实验性干眼症(EDE).  小鼠被放置在受控制的环境室(湿度30±5%,恒定的气流,温度25±1°C)14天。氢溴酸海俄辛通过皮下注射渗透泵给药(0.1毫克/天)。2周(14天)后泵被取出。经过14天的干燥应力,动物被转移到正常的住房条件(湿度45-55%、无气流、温度24±2°C)生活3个星期。自动检查温湿度变化并每小时保存一次。
 
局部治疗:两种不同的治疗方案:(晚期治疗/治疗)适用于第11天开始的局部治疗(5微升 /眼,每日3次),或(早期治疗/预防)从第4天开始的局部治疗(5微升 /眼,每日3次)。小鼠被分布在四个组:(1)以0.5%乙醇为溶剂的0.05% CS / f4h5。(2)含0.5%乙醇f4h5载体(3)restasis(4)地塞米松诱导(1 mg/ml)对照组未治疗,不接受滴眼液但被安置在相同的干燥应力和标准的住房条件作为四治疗组。
 
参数读取:
 
干眼的临床体征: 泪液和角膜上皮病变一周测量一次:时间点(TP) TP1:第0天,TP2:第11天,TP3:第18天,TP4:第25天,TP5:第32天。为了测量泪液的产生,将苯酚红色的丝线放置在下眼睑内侧30毫米,以毫米记录。用荧光素染色检测角膜损伤:在生理盐水溶液中5%荧光素涂抹到角膜上,在蓝光下观察角膜损伤程度从0级到5级。第35天处死小鼠,取眼结膜。量化杯状细胞数目,进行石蜡包埋,切片,用PAS对杯状细胞进行染色。图像使用明视野显微镜和彩色摄像机拍摄共同获得。对杯状细胞进行手动计数。对有代表性切片的结膜中央区域进行分析,7-12只眼/组取决于可用的完全对齐的横截面。
 
流式细胞仪分析: 3只对照组小鼠,3只接受f4h5或CS / f4h5小鼠在TP1,TP3和TP5通过引流淋巴结收集淋巴液。根据制造商的指示,单细胞悬液添加用FITC标记的抗-CD8抗体,APC共轭的抗CD4抗体,PE共轭的抗CD25抗体和FITC标记的抗Foxp3抗体,进行T细胞和调节性T细胞(Treg)分析。
 
结果:晚期治疗方案泪液产生:相比较TP2,终止干燥应力后酚红法测量泪液分泌显示经过7天的治疗所有组泪液分泌显著增加, 泪液产量类似于基线(未诱导干眼病),相比较F4H5,restasis?,地塞米松和未经处理的对照组,CS / f4h5治疗组在TP3-5显示显著增加泪液产生量。在TP5,CS / f4h5效果较对照组不明显。
 
角膜荧光染色:晚期治疗后用荧光素染色进行角膜损伤分析在TP2各组染色均显著增加。治疗后1周(TP3),只有CS / f4h5观察组的荧光素染色显著降低。restasis?和地塞米松治疗组最早在TP4出现荧光素染色降低。
 
杯状细胞密度:在治疗后期,在TP5,相比所有组天然小鼠表现出显着较高的杯状细胞(GC)密度。晚期治疗后,相比于其他组,地塞米松处理组有较低的杯状细胞密度。CS / f4h5也有较低的杯状细胞密度。
 
结论:相比restasis,本实验使用CS / f4h5能更快更显著有效地对实验性干眼症进行局部治疗。
 
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