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建立人α突触核蛋白A30P突变的帕金森病大鼠模型

2018年11月19日 浏览量: 评论(0) 来源:中国实验动物学报2018年第5期 作者:宋娜 王海军 李宏彬 邵明龙 张伟 谷腾腾 胡庆 余建 张景航 苏蔚 赵铁锁 李雨姗 责任编辑:admin
摘要:建立人α⁃突触核蛋白(α⁃synuclein,α⁃SYN)A30P突变型转基因大鼠的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型

目的:建立人α⁃突触核蛋白(α⁃synuclein,α⁃SYN)A30P突变型转基因大鼠的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)模型。

方法:利用慢病毒系统构建过表达野生型 α⁃SYN 载体pLKO⁃CMV⁃α⁃SYN⁃WT⁃P2A⁃GFP及 α⁃ SYNA30P突变载体pLKO⁃CMV⁃α⁃SYN⁃A30P⁃P2A⁃GFP,分别转染293FT细胞,瞬时转染24h后WB检测α⁃SYN的 表达水平。 之后经慢病毒包装、浓缩,利用立体定位技术分别对大鼠中脑黑质致密部注射病毒稀释液,过表达 α⁃ SYN 野生型和A30P突变型的慢病毒颗粒。 免疫荧光染色检测α⁃SYN和酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH) 的分布情况,并观察中脑黑质致密部多巴胺能神经元数量的变化。 Rotatingrod实验评价注射A30P慢病毒大鼠的 行为改变情况。

结果:野生型和突变型A30P的基因表达载体在293FT细胞内能够高表达α⁃SYN蛋白。 TH免疫 荧光结果显示:与病毒稀释液组相比,过表达α⁃SYN 野生型和A30P突变型大鼠均能导致中脑黑质致密部多巴胺能 神经元数量的减少,而 α⁃SYNA30P慢病毒注射组的中脑黑质神经元缺失的更多,具有显著性差异。 对A30P转基 因大鼠脑部神经元缺失部位进行免疫荧光发现,该区域TH染色几乎呈阴性,α⁃SYN蛋白出现大量聚集,该结果表 明脑部神经元的消失同时伴随着α⁃SYN蛋白的聚集及TH表达的剧烈减少,进一步揭示过表达 α⁃SYN A30P可以 导致多巴胺能神经元数量的减少和退化。 此外,rotatingrod实验结果显示过表达α⁃SYNA30P大鼠表现出明显的进 行性运动能力障碍。

结论:通过慢病毒系统建立了人 α⁃SYNA30P突变型转基因大鼠的PD模型,为PD发病机制 的研究及药物开发奠定基础。 

全文阅读: 建立人α突触核蛋白A30P突变的帕金森病大鼠模型 

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