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B-hCD28免疫检查点人源化小鼠

2019年01月17日 浏览量: 评论(0) 来源:百奥赛图 作者:百奥赛图 责任编辑:admin
摘要:随着生物治疗研究的深入和广泛的应用,单抗药物一些独特的不良反应也被持续的关注。如一些药物引起的肝脏毒性,有些则会引起全身性的免疫反应轻则引起不适,重则会导致多器官的功能障碍综合征,甚至造成死亡。

随着生物治疗研究的深入和广泛的应用,单抗药物一些独特的不良反应也被持续的关注。如一些药物引起的肝脏毒性,有些则会引起全身性的免疫反应轻则引起不适,重则会导致多器官的功能障碍综合征,甚至造成死亡。

在探究抗体药物毒性的过程中人源化小鼠成为一有力的工具。今天就为大家介绍一种CD28基因的人源化小鼠——B-hCD28小鼠

CD28基因功能简介

CD28( Cluster of Differentiation 28) 表达在T细胞上,是T细胞激活与存活的共刺激信号。CD28和TCR共激活的T细胞具有表达多个细胞因子的能力(尤其是IL-6)。CD28是唯一组成性表达在naïve T细胞上的B7家族受体(包括B7.1(CD80)和B7.2(CD86))。TCR和MHC:抗原复合体结合后,倘若没有CD28:B7共刺激信号,T细胞是无活力的(anergic)。成熟的T细胞表达CTLA-4,和CD28竞争性结合B7,抑制T细胞过度激活。CD28激动剂可激活T细胞,促进免疫反应,目前CD28抗体的应用研究在临床II期[1] [2]

1、CD28抗体的故事:

2006年轰动一时的TGN1412(CD28抗体)临床实验,是一起灾难性的药物安全性事件。当年,英国一家药物临床实验公司为德国TeGenero公司研制的CD28抗体进行临床实验,用于治疗自身免疫病和白血病。在给8名健康受试者(两名为安慰剂对照)应用药物仅数小时后,6名志愿者出现了细胞因子释放综合征(cytokine release syndrome,CRS ),受试者出现不同程度的肺、肾衰竭和凝血机制障碍。虽然经过及时抢救6名志愿者挽回了生命,但也将承受免疫系统损坏的终身痛苦[3]

英国药监机构对此事故做了调查,但并未发现TGN1412(CD28抗体)在制备和使用环节出现任何失误,临床前的动物实验也显示此药是安全的。但以给猴子安全剂量的1/500注射到人体后,却引起了严重的细胞因子风暴。在此事件后,各药物研发团队和药品使用监管机构对单抗的使用都更为谨慎。

2、原因分析:

科学家们也对这一事故的原因进行深入的研究分析。造成这一毒性反应主要原因是CD4+ T细胞短期集中释放大量的细胞因子,其中包括:肿瘤坏死因子(TNF),干扰素(IFN)和白细胞介素(IL)等。而TGN1412(CD28抗体)可以刺激CD4CD45RO释放细胞因子。但临床前的动物实验却没有反应出此药物潜在的毒性问题。此原因可能是由于用于实验的小鼠周龄较小且生长环境干净,使得它组织驻留的CD4效应记忆细胞(CD4EM)是比较缺乏的,CD28抗体引起的反应很容易被Treg细胞所抑制。即便科学家在将CD28抗体应用于小鼠之前立即去除Treg细胞,大量的循环TNF,IL-2和IL-6变得可检测,但小鼠并没有表现出明显的反应[4]。而在猴子体内虽然有CD4T细胞,但CD28的表达确是缺乏的, 故没有受到TGN1412抗体激动[5]。在人体内,虽然剂量远远低于动物实验剂量,但能够已触发大量的细胞因子释放导致强烈的毒性反应。

3、故事结局:

经过科学家的不懈努力,在深入研究了CD28抗体各种机制以及造成毒性反应的原因,吸取历史的教训后,科学家对CD28抗体药物重新进行测试并采取的更为严谨的预防措施。使得CD28抗体又重新回到了药物研发科学家的视野中。其给药剂量为体重0.1ug/kg,低于2006年临床实验给药剂量的1000倍[3]

4、我们能做什么?

科学在不断的进步发展,新的技术也层出不穷。百奥赛图在致力于打造基因编辑模式动物的的一站式新药研发服务平台,助力全球药企开发创新药物的宗旨下,开发了一系列用于评价抗体药物的小鼠模型,其中之一就有针对CD28抗体药物研发的CD28人源化小鼠(B-hCD28)。

基本信息

蛋白表达分析

B-hCD28人源化小鼠脾细胞活化及流式检测

结果显示:在C57BL/6小鼠活化T细胞里,可检测到mCD28+细胞。在B-hCD28纯合鼠活化T细胞里,可检测到hCD28+细胞。

B-hCD28模型验证

    ——免疫后小鼠抗体效价比较

利用hPDL1-his重组蛋白与CFA乳化后免疫C57BL/6和B-hCD28小鼠。14天后检测免疫后小鼠血清中IgG1,IgG2a, IgG2b各亚型特异性抗体效价。检测结果无显著差异,说明hCD28小鼠B7-1/CD28共刺激信号途径正常,嵌合CD28分子具有正常生物学活性

参考资料

1. https://en.wikipedia.org/wiki/CD28

2. J Immunol. 2016 September 15; 197(6): 2045–2050. doi:10.4049/jimmunol.1601135.

3. FEBS J. 2016 Sep;283(18):3325-34. doi: 10.1111/ febs. 13754. Epub 2016 Jun 6. 

4. PLoS One. 2009;4(2):e4643. doi: 10.1371/journal. pone.0004643. Epub 2009 Feb 27. 4, e4643.

5. J Immunol. 2010 Apr 15;184(8):4185-95. doi: 10.4049/jimmunol.0903420. Epub 2010 Mar 15.


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