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慢病毒载体介导HCV受体基因OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞的影响

2019年01月21日 浏览量: 评论(0) 来源:中国实验动物学报2018年第6期 作者:陆彩霞 孙晓梅 王文广 匡德宣 李娜 仝品芬 李明学 代解杰 责任编辑:admin
摘要:观察在体外培养条件下,慢病毒载体介导的HCV受体基因 OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间 充质干细胞生物学特性的影响及基因的表达情况。

目的:观察在体外培养条件下,慢病毒载体介导的HCV受体基因 OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间 充质干细胞生物学特性的影响及基因的表达情况。

方法:利用本室分离鉴定保存的树鼩 BM-MSCs,构建含人 OCLN/CD81基因的慢病毒载体,并分别将 CD81和 OCLN 基因转染到BM-MSCs中,荧光倒置显微镜和流式细胞仪 检测转染效率,CCK8法检测转染后BM-MSCs的细胞增殖情况,成骨成脂细胞诱导分化检测其多向分化潜能。 采 用实时荧光定量及WB方法检测HCV受体(OC/CD81)基因mRNA和蛋白表达情况和转染后BM-MSCs干性基 因的表达。

结果:以MOI为100 转染含人 OCLN/CD81 基因的慢病毒载体后,LV-CD81 转染效率达99.4%,LVOCLN转染效率22.6%。 细胞增殖趋势与未转染基因的BM-MSCs相似,转染后的BM-MSCs仍可以向成骨成脂细 胞分化,但能力有所下降。 干性基因NANOG mRNA表达增高,差异有显著性(P< 0.05),LIN28AmRNA表达下降, 差异有显著性(P<0.05)。 转染后树鼩BM-MSCs能高效表达所转入的外源基因。

结论: 构建的含人OCLN/CD81 基因的慢病毒载体可以成功转染树鼩BM-MSCs,并高效表达所转入的基因,转染后对树鼩BM-MSCs的多向分化潜 能有一定的影响。 

全文阅读:慢病毒载体介导HCV受体基因 OCLN/CD81转染 对树鼩骨髓间充质干细胞的影响 

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