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疾病与药物研究

在这“草长莺飞”的季节,带你重新认识CD3e!

2019年05月09日 浏览量: 评论(0) 来源:百奥赛图 作者:百奥赛图 责任编辑:admin
摘要:CD3e( CD3e molecule)编码CD3-epsilon多肽,与CD3-gamma,-delta,-zeta和体细胞受体alpha/beta或gamma/delta共同构成TCR-CD3复合物。此复合物在抗原识别和细胞内信号转导途径方面起着非常重要的作用。近年来,利用人CD3和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体进行抗肿瘤治疗手段被广泛研究。

背景介绍

CD3e( CD3e molecule)编码CD3-epsilon多肽,与CD3-gamma,-delta,-zeta和体细胞受体alpha/beta或gamma/delta共同构成TCR-CD3复合物。此复合物在抗原识别和细胞内信号转导途径方面起着非常重要的作用。近年来,利用人CD3和肿瘤相关抗原(TAA)的双特异性抗体进行抗肿瘤治疗手段被广泛研究。

但由于小鼠CD3复合体的胞外区与人类种间同源性相对较低,人CD3特异性治疗抗体不能有效激活小鼠效应T细胞,需建立一个适合于评估人类CD3特异性治疗的实验动物模型。百奥赛图人源化CD3e小鼠(B-hCD3e mice),为双抗的药效验证提供了有力工具。

TCR-CD3 complex and its signal pathway[1]

mCD3e全人源化小鼠分析

将mCD3e全人源化替换为hCD3e,对纯合后代脾脏,胸腺,PBMC及淋巴结进行流式细胞分析,观察小鼠T细胞发育是否正常。

以上研究结果表明,相对于野生型,hCD3e全人源化纯合小鼠脾脏,胸腺,PBMC及淋巴结中mCD3+细胞含量较低且CD4、CD8分化差异较大,表明全人源化策略致其T细胞发育过程受阻,此方案制备的小鼠不适于后续药理药效评价。

基于此,考虑到全人源化可能对mCD3e胞内信号传递的影响,百奥赛图重新优化打靶方案,仅对mCD3e进行胞外区人源化改造,保留其鼠源的信号传导功能,得到B-hCD3e mice.同样对其纯合后代脾脏,胸腺,PBMC及淋巴结进行流式细胞分析,结果如下:

以上研究结果表明,mCD3e胞外区人源化纯合小鼠(B-hCD3e mice)脾脏,胸腺,PBMC及淋巴结中,各细胞细胞比例与野生型小鼠相比无显著差异,表明T细胞分化未受胞外区人源化改造影响。

不是所有人源化小鼠都能有正常功能,不是所有CD3人源化小鼠都叫B-hCD3e mice哦!

后续基于B-hCD3e mice模型的体外检测及体内药效等实验数据也进一步证明了该模型的优势所在,具体信息如下所示:B-hCD3e mice基本信息
 

基本信息


打靶策略

蛋白表达分析

流式分析结果显示:野生型 C57BL/6 小鼠中检测到mCD3+蛋白表达,纯合B-hCD3e小鼠中检测到hCD3+蛋白表达。 

体外检测CD3抗体激活T细胞

从野生型C57BL/6和纯合B-hCD3e小鼠的脾细胞中分离T细胞 (n=4),与抗CD3抗体(B-hCD3e, anti-hCD3;C57BL/6, anti-mCD3)及抗mCD28抗体孵育24h, 48h,72h。ELISA检测IFN-γ and IL-2.

结果表明:IFN-γ 和 IL-2的表达水平在B-hCD3e和C57BL/6中无显著差异。

CD3抗体药效实验

   

C57BL/6(A) 和B-hCD3e(B)接种MC38细胞系,待肿瘤体积约150±50mm3 后分组(n=5),结果显示:两种小鼠模型中,mPD-1抗体均显著抑制肿瘤生长,表明:胞外区人源化改造对B-hCD3e小鼠T细胞的胞内信号传递无明显影响。同时,hCD3e抗体显著促进B-hCD3e小鼠肿瘤生长,而对C57BL/6小鼠肿瘤的生长基本无影响。进一步研究表明:给药(hCD3e抗体)后出现AICD效应,B-hCD3e小鼠T细胞被清除,进而促进肿瘤生长。

流式检测外周血中B细胞和T细胞比例

结果显示:hCD3抗体组中,由于hCD3e抗体引起AICD效应,T细胞比例显著降低。但B细胞比例无明显变化。(A)与hIgG Ab相比,CD19细胞各组间无显著性差异。(B)与hIgG Ab相比,h-CD3 Ab治疗后血液中TCR-β%降低。

基于B-hCD3e小鼠的双特异性抗体药效实验

接种hCD19-MC38细胞系至小鼠皮下,肿瘤组织接近150±50mm3时进行分组(n=6),注射高、中、低不同剂量的Blinatumomab。

结果表明:高剂量的hCD3e双特异性抗体(Blinatumomab)能够显著抑制肿瘤生长。证明B-hCD3e小鼠可以评估双特异性抗体体内药效。A.肿瘤体积±SEM B.小鼠平均体重±SEM。

参考文献

[1]Immunology. 2018 Jan;153(1):42-50. doi: 10.1111/imm.12809. Epub 2017 Sep 5.

百奥赛图双抗动物模型列表

  

百奥赛图双抗细胞系模型列表

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