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细胞转染实验注意事项

1.如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或2×106-4×106细胞/ml(悬浮细胞)为宜,最好在转染前4h换一次新鲜培养液。
2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和其他化学物质的污染,OD260/280比值应在1.8以上。
3.培养基中的血清
在开始准备DNA和阳离子脂质体试剂稀释液时要使用无血清的培养基,因为血清会影响复合物的形成。其实,只要在DNA-阳离子脂质体复合物形成时不含血清,在转染过程中是可以使用血清的。
4.培养基中的抗生素
抗生素是影响转染的培养基添加物。这些抗生素一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率降低。这时候可以选择Entranster转染试剂,非脂质体试剂,培养基可加抗生素,避免了细胞染菌。
5.设置阳性对照和阴性对照。
6.一般在转染24-48h,靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的,24-48h后即可进行靶基因表达的检测实验。
7.如若建立稳定的细胞系,则可对靶细胞进行筛选,根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物,常用的真核表达基因载体的标志物有潮霉素和新霉素等。
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