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利用双重sgRNAs构建miR-223全基因敲除小鼠

2019年07月05日 浏览量: 评论(0) 来源:中国比较医学杂志2019年第6期 作者:赵宣 王晓亚 刘莉 刘佩娟 辛智倩 师长宏 张彩勤 白冰 黄勇 张海 责任编辑:admin
摘要:利用双重 sgRNAs 构建 miR-223 全基因敲除小鼠。

目的:利用双重 sgRNAs 构建 miR-223 全基因敲除小鼠。

方法:针对 miR-223 基因设计双重 sgRNAs,将体外转录的sgRNAs和Cas9mRNA共同显微注射入C57BL/6小鼠受精卵细胞。 小鼠出生后取其基因组 DNA进行PCR扩增和测序以鉴定基因型,同时取小鼠肝脏研磨后提取总RNA,通过real-timePCR分析miR-223在 肝脏中的表达。

结果:设计了miR-223 基因双重sgRNAs并对其进行了体外转录,纯化后显微注射小鼠受精卵细 胞获得miR-223基因突变小鼠。 测序结果表明突变小鼠有3种基因型,一种为6bp的缺失突变,但未对miR-223 序列产生影响;另外两种为162bp和168bp的缺失突变,完全删除miR-223前体和成熟区序列。 与野生型相比,这 两种小鼠肝组织中几乎不能检测到miR-223的表达。

结论:设计双重sgRNAs并应用CRISPR/Cas9技术成功构建 miR-223全基因敲除小鼠。

全文阅读:利用双重sgRNAs构建miR-223全基因敲除小鼠

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